产品介绍: |
产品组成:
名称 |
规格 |
保存 |
2×CTAB提取缓冲液 |
500 ml |
RT |
还原剂 |
1 ml |
RT |
产品说明: CTAB (hexadecyltrimethylammonium bromide,十六烷基三甲基溴化铵),是一种阳离子去污剂,具有从低离子强度溶液中沉淀核酸与酸性多聚糖的特性。在高离子强度的溶液中(>0.7mol/L NaCl) CTAB与蛋白质和多聚糖形成复合物而不沉淀核酸。通过有机溶剂抽提,去除蛋白、多糖、酚类等杂质后加入乙醇沉淀即可使核酸分离出来。 2×CTAB提取缓冲液成分:2%(w/v)CTAB,100mM Tris (pH 8.0),20mM EDTA,1.4M NaCl,0.2%(v/v) 还原剂(随用随加) 。 操作步骤(仅供参考):
- 2×即用型CTAB提取液配制:
- 按照终浓度0.2% (v/v)加入还原剂,如100ml 2×CTAB提取缓冲液中加入0.2 ml 还原剂。加入还原剂后的2×即用型CTAB提取液4℃贮存。
- 取0.2-0.5克新鲜植物材料,于液氮中研磨成粉末。
- 将粉末转入预冷的1.5ml离心管中,立即加入0.7 ml 2×即用型CTAB提取缓冲液,65℃水浴30分钟,间歇混匀。
- 加入等体积的酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),轻缓颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm 离心10分钟。
- 将上清液转入另一1.5ml离心管中,加入等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),颠倒离心管混匀8-10次,常温12000 rpm离心10分钟。
- 将上层水相转入新的1.5 ml离心管中,加入0.6倍体积的冰冷异丙醇,轻柔混匀,冰浴30分钟。
- 12000 rpm4℃ 离心10分钟。
- 去上清液,加入1ml 70%乙醇漂洗沉淀,4℃12000 rpm 3分钟,吸弃乙醇。
- 4℃ 12000 rpm 1分钟,用移液器吸尽残余乙醇,超净台吹干沉淀。
注:1.沉淀不能彻底干燥,否则不好溶解。 2.加入30-50μl的超纯水或TE缓冲液溶解DNA,-20℃保存备用。 |